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線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性測定試劑盒

試驗中所需的儀器和試劑：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微玻璃比色皿/96 孔板（非 聚苯乙烯材質(zhì)）、研缽、冰和蒸餾水。
復(fù)合體Ⅲ的提取：

① 稱取約0.1g組織或收集500萬細(xì)胞，加入1.0 mL提取液，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

② 4 ℃ 600 g離心10min。

③ 將上清液移另一離心管中，4 ℃ 11000 g離心15min。

④ 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅲ（此步可選做，可以判斷線粒體提 取效果）。

⑤ 在沉淀中加入200uL提取液，超聲波破碎（功率20％，超聲5秒，間隔10秒，重復(fù)15次），用于 復(fù)合體Ⅲ酶活性測定，并且用于蛋白含測定。

注意事項：

1、盡保持比色皿內(nèi)反應(yīng)液溫度在37℃或25℃。可以在記錄初始吸光度A1后迅速將比色皿連同反 應(yīng)液一起放入37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)2分鐘，之后迅速取出比色 皿并擦干，記錄2min時的吸光度。

2、當(dāng)測定吸光值大于1時，建議將樣品用提取液稀釋后測定，計算公式中注意乘以稀釋倍數(shù)。

3、此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度，推薦本公司BCA蛋白濃度含測定試劑盒。

4、由于提取液中含有蛋白，所以在測定樣品蛋白濃度時需要去提取液本身的蛋白含(單獨測定)。

5、推薦使用樣本蛋白濃度計算酶活，若用樣本鮮重計算，則需加測胞漿提取物酶活，上清和沉淀 酶活之和方為總酶活。

6、本試劑盒試劑足夠完成 100 管反應(yīng)。

7、附:使用樣本重計算公式：（樣本檢測數(shù)為 100T/24S）

相關(guān)文獻(xiàn)：

《Weanling Offspring of Dams Maintained on Serine-Deficient Diet Are Vulnerable to Oxidative Stress》 作者:Liuqin He, Haiwen Zhang, and Xihong Zhou 期刊:Oxidative Medicine and Cellular Longevity 影響因子:4.868 PMID:30305866
《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:29503638
 

線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性測定試劑盒